Partial purification of intestinal triglyceride lipase from Cyprinion acrostomus Heckel, 1843 and effect of pH on enzyme activity

Abstract

Cyprinion macrostomus incebağırsak Lipaz’ının% 30 polietilen glikol (PEG) ile çöktürülmesinden sonra, hidrofobik etkileşim kromatografisi ile kısmi saflaştırılması ve pH’nın enzimatik aktivite üzerine etkisi titrasyon yöntemiyle araştırılmıştır. incebağırsak doku homojenatı %30 PEG-8000 ile çöktürülmüş ve fenil sefaroz ile hidrofobik etkileşim kromatografisine uygulanmıştır. Matriks ile bağ kurmuş olan ve bu şekilde kısmi olarak saflaştırılan lipaz aktivitesi taurokolik asit ve triton X-100 çözeltileri ile geri alınmıştır. Saflaştırılan enzim deneysel koşullar altında doğal zeytin yağı substrat’ını etkili şekilde hidrolizleşmiştir. incebağırsak lipaz aktivitesi için optimum pH’nın 7.50 olduğu saptanmıştır. %94.37’lik bir verim ve 71.54-kat saflaştırma parametreleri saptanmıştır. Poliakrilamid disc-continuos jel elektroforezi (Disk-PAGE) ile denatöre edici etken içermeyen koşullar altında bu Lipaz’ın molekül kütlesi 51 kDa. olarak tespit edilmiştir. Bu balığın incebağırsak doku lipaz’ının alkali karakterde olduğu sonucuna varılmıştır.

: Intestinal triglyceride lipase (TG) of Cyprinion macrostomus after precipitation with 30% polyethylene glycol (PEG), was partially purified by hydrophobic interaction chromatography on phenyl sepharose CL-4B, and the effect of pH on this enzyme activity was determined titrimetrically. Intestinal tissue homogenates were precipitated using 30% PEG-8000, and then applied onto a phenyl sepharose CL-4B column for hy-drophobic interaction chromatography. The lipase that bound to this hydrophobic resin and was partially purified by this single step application was then eluted from this resin with taurocholic acid and Triton X-100 elution. This purified enzyme effectively hydrolysed natural olive oil substrate under the experimental conditions. An optimal pH of 7.50, and 94.37% yield, and 71.54-fold purification parameters were estimated for this lipase. The molecular mass of this enzyme was determined to be 51 kDa under non-denaturing conditions by polyacrylamide disc-gel electrophoresis (Disc-PAGE). It was concluded that the intestinal lipase of this fish is alkaline in character.