The investigation of Cryptosporidium spp. in water samples by PCR

Abstract

Amaç: Sivas ve çevresinde insanlarda, insanlara kaynak oluşturan insan ve hayvan çıkartılarıyla kirlenme olasılığı yüksek içme ve kullanma sularında bu parazitin prevalansını PCR yöntemiyle saptamaktır. Yöntem: Bu amaçla; Sivas ilçe ve köylerinden toplam 92 örnekten en az 10 litrelik su örneği plastik bidonlarla toplanmış ve filtre edilmiştir. Modifiye Asit Fast (MAF) boyama yöntemi için yayma preparatları hazırlanmış ve 100x’lik objektifle Cryptosporidium spp. yönünden incelenmiştir. Tüm örneklerden DNA izolasyonu ticari bir kit (QIAGEN - QIAamp DNA Stool Mini Kit) kullanılarak yapıldı. Örneklerde Cryptosporidium 18S SSU rRNA lokusunun PCR ile çoğaltılması sonucu tanıya gidilmiştir. Bulgular: İncelenen 92 su örneğinin asit-fast ile hiç birinde PCR ile 2’sinde (%2,2) Cryptosporidium spp. saptanmıştır. Pozitif örnekler musluk sularından saptanmış olup kaynak sularında parazit bulunmamıştır. Pozitif örnekler Kangal ve Suşehri ilçelerine bağlı iki köyden elde edilen musluk sularından saptanmıştır. Sonuç: Çevresel su örneklerinde Cryptosporidium varlığı birkaç yöntemle araştırılmalıdır. Direkt ve Asit-fast boyama yöntemiyle yapılan incelemeler başarılı bulunmamıştır. Çünkü su örneklerinde ookistlerin yapısal özellikleri bozulmakta ve tanınmaları zorlaşmaktadır. Cryptosporidium spp.’nin saptanmasında PCR daha duyarlı bir yöntemdir.

Objective: Cryptosporidium spp. are intestinal pathogens of humans and animals. Environmental and tap water samples obtained from different regions in Sivas were examined for the prevalence of Cryptosporidium infection. Methods: Approximately 10 lt of water collected and filtered from spring and tap waters from villages and towns in Sivas province were examined. All samples were examined both with the Modified Acid Fast (MAF) staining method and PCR for the presence of Cryptosporidium spp. A genus specific PCR assay was designed for the specific amplification of the 18S SSU rRNA gene. Results: None of the 92 water samples analyzed by MAF were positive, whoever 2 water samples (2.2%) from the Kangal and Suşehri counties were positive by PCR. Conclusions: The PCR technique is more reliable in diagnosing Cryptosporidium in water samples. It is possible that the oocysts are decomposed in water and it is difficult to identify them by MAF.