Lokal giardia intestinalis suşlarının izolasyonu, ekskistasyonu ve in vitro üretilme koşullarının geliştirilmesi

Bu araştırmada Giardia intestinalis kistlerinin insan dışkısından saflaştırılması, saflaştınlan kistlerin ekskistasyonu yapılarak in vitro koşullarda aksenik kültürleri denenmiştir. Bu amaçla Giardia intestinalis'li 30 farklı kişiden alınan dışkı örnekleri 3 farklı sukroz-gradient yöntemiyle saflaştınlmıştır. İn vivo koşullarda, sindirim yoluyla alınan olgun kistlerden canlı trofozoitlerin çıkışı yani ekskistasyonu in vitro koşullarda yine 2 farklı yöntemle yapılmıştır. Bu iki yöntemden özellikle pepsin-asid solüsyonu kullanılarak yapılan yöntemin daha uygun olduğu saptandı. Ekskistasyon aşaması sırasında asitten kurtarmak için yıkama işlemleri uygulandı. Yıkama işleminde ise en uygun yöntemin Trypsin-Tyrode çözeltisinde yıkama olduğu belirlendi. Trypsin-Tyrode çözeltisinde yıkanan kistlerin TYI-S-33, BI-S-33, HSPs ve TPS l besiyerlerinde kültürleri denendi. Bu besiyerlerinden pan-made içeren TPS-1 besiyeri en uygun besiyeri olarak saptandı. Ancak bu besiyerinde Giardia intestinalis trofozoitlerinin, besiyerine inokülasyonundan 106 saat sonra öldükleri gözlendi. Daha uzun süreli kültürler oluşturabilmek amacıyla çalışmalarımız devanı etmektedir.